| نوع مدرک: | متون چاپی |
| سرشناسه | ابارشی ، مونا، نویسنده |
| شماره بازیابی : | BIO microb 69 1403 |
| عنوان : | بررسی تأثیر عوامل فیزیکی و شیمیایی روی باکتریوفاژ سودوموناس ائروژینوزا و تعیین تیتر بهینه جهت اثرگذاری روی این باکتری |
| عنوان موازی : | Investigating the effect of physical and chemical factors on Pseudomonas aeruginosa bacteriophage and determining the optimal titer to affect this bacterium |
| ناشر: | دانشگاه شهید اشرفی اصفهانی: اصفهان |
| سال نشر : | 1403 |
| صفحه شمار: | 67ص |
| شابک/شاپا | 25850 |
| یادداشت | پایان نامه کارشناسی ارشد: رشته میکروبیولوژی گرایش میکروارگانیسم های بیماری زا |
| شناسه افزوده : | قاسمی ، سید مهدی، استاد راهنما مرادی ، مریم، استاد مشاور |
| توصیفگرها | باکتریوفاژ، سودوموناس آئروژینوزا، تیتر ، دما ، Bacteriophage, Pseudomonas aeruginosa, titer, temperature, pH |
| چکیده : | سودوموناس آئروژینوز(Pseudomonas aeruginosa) ا یکی از علل شایع عفونت های بیمارستانی است و مقاومت زیادی در برابر آنتی بیوتیک ها از خود نشان می دهد که در موارد شدید باعث مرگ و میر و می شود. یک گزینه درمانی جایگزین برای عفونت های باکتریایی استفاده از باکتریوفاژها (یا فاژها) است. باکتریوفاژ درمانی به عنوان یک جایگزین امیدوارکننده برای آنتی بیوتیک های سنتی برای درمان عفونت های ناشی از باکتری های مقاوم به چند دارو ظاهر شده است. بنابراین هدف از این مطالعه به بررسی تأثیر عوامل فیزیکی و شیمیایی بر باکتریوفاژهای موثر بر سودوموناس ائروژینوزا و تعیین تیتر بهینه جهت اثرگذاری بر این باکتری بود. در این مطالعه نمونه های سودوموناس آئروژینوزا از بیمارستان الزهرا جمع آوری و باکتریوفاژهای مؤثر علیه این سویه ها جداسازی شد. 50 میلیلیتر از پساب شهری در لولههای فالکون 50 میلیلیتری قرار داده شد و به مدت 20 دقیقه با سرعت 4000 دور در دقیقه در سانتریفیوژ چرخانده شد. مایع رویی حاصل از سانتریفیوژ با 50 میلیلیتر محیط کشت BHI با غلظت X 2 مخلوط شد. برای افزایش تعداد باکتریوفاژها، این مایع با باکتری Pseudomonas aeruginosa به مدت 24 ساعته از تمام 22 سویه باکتری تلقیح و انکوبه شد. سپس مجددا جهت جداسازی باکتریوفاژها از باکتریها به مدت 20 دقیقه با دور 4000 دور در دقیقه سانتریفیوژ گردید. بعد از آن مایع رویی از طریق فیلترهای مخصوص برای حذف باکتریها عبور داده شد. محلول فیلترشده به یک لوله فالکون استریل منتقل و در یخچال تا زمان استفاده نگهداری شد. برای بررسی وجود باکتریوفاژها، آزمایش لکهگذاری انجام شد ودر آزمایشهای انجام شده، پلاکهای ایجاد شده بر روی پلیتهای آگار به منظور ارزیابی فعالیت باکتریوفاژها و تعیین شمارش واحدی پلاکها (PFU/ml) شمارش شد. چندین فاژ بررسی شد ولی فاژی که بهترین جواب را داد بررسی شد. برای خالصسازی باکتریوفاژها، از روش رقت سری استفاده شد که در آن رقتهای 1- 10 تا 9- 10 با بهرهگیری از بافر SM استفاده شد. جهت بررسی پایداری حرارتی، فاژها به محیط کشت BHI اضافه شد و مخلوط ها در دماهای مختلف (4، 30، 37، 45، 70- و 20 درجه سانتی گراد) به مدت 24 ساعت انکوبه انجام شد. پس از انکوباسیون، تیتر هر نمونه فاژ به روش لایه دو آگار بررسی شد. همچنین برای بررسی تاثیر pH های مختلف (3، 5، 7، 9و 11) در دمای اتاق (21 درجه سانتیگراد) به مدت 24 ساعت قرار گرفت و بعد از این مدت تیتر فاژی با استفاده از تکینیک آگار دو لایه اندازه گیری شد. آزمایش رشد، سویه P. aeruginosa در BHI به غلظتCFU/ml 7 10 × 1 رشد داده شد. سپس در 01/0 MOI (معادل PFU/mL 10 10 × 1) به کشت اضافه و اجازه داده شد به مدت 10 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی گراد جذب شود. مخلوط به مدت 1 دقیقه در 14000 × گرم سانتریفیوژ و پس از دو بار شستشو با BHI تازه در 10 میلیلیتر محیط رشد معلق خواهند شد و کشت در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 24 ساعت انکوبه شد. شمارش فاژهای آزاد پس از نمونه برداری در 3، 5، 10، 20، 30، 40، 50 و 60 دقیقه با استفاده از روش پوشش دوگانه آگار با تیتراسیون تعیین شد. یافتههای این تحقیق نشان دادبا توجه به نتایج آزمونهای پایداری حرارتی فاژها در دماهای 4 و 37 درجه سانتیگراد از پایداری بهتری برخوردار بودند. در حالی که در دماهای بسیار پایین (70- درجه سانتیگراد) و بسیار بالا (45 درجه سانتیگراد)، کاهش قابل توجهی در فعالیت فاژها مشاهده شد. نتایج حساسیت باکتریوفاژ به pH نشان دادند که بالاترین فعالیت و کمترین فعالیت مربوط به محدوده 5 تا 7 pH و pHهای بسیار پایین (3 pH) و بسیار بالا (11 pH)است. آزمایشات مربوط به تعیین بهترین نسبت MOI نشان داد که در نسبت MOI 1/0، بیشترین میزان جذب و تکثیر فاژها به دست آمد. این نتایج به درک بهتری از ویژگیهای پایداری و فعالیت باکتریوفاژها تحت شرایط مختلف فیزیکی و شیمیایی کمک میکند و میتواند به بهبود کاربردهای عملی فاژها در کنترل عفونتهای باکتریایی و دیگر کاربردهای بیولوژیکی کمک نماید |
| لینک ثابت رکورد: | ../opac/index.php?lvl=record_display&id=14686 |
| زبان مدرک : | فارسی |
بررسی تأثیر عوامل فیزیکی و شیمیایی روی باکتریوفاژ سودوموناس ائروژینوزا و تعیین تیتر بهینه جهت اثرگذاری روی این باکتری (1403) / ابارشی ، مونا، نویسنده