| نوع مدرک: | متون چاپی |
| سرشناسه | موسوی ، الهام سادات، نویسنده |
| شماره بازیابی : | BIO microb I 17 1402 |
| عنوان : | بررسی تولید پپتید های ضدباکتری از باسیلوس کوآگولانس |
| عنوان موازی : | Study of Antibacterial Peptides Production from Bacillus coagulans |
| ناشر: | دانشگاه شهید اشرفی اصفهانی: اصفهان |
| سال نشر : | 1402 |
| صفحه شمار: | 97ص |
| شابک/شاپا | 25589 |
| یادداشت | پایان نامه کارشناسی ارشد: رشته میکروبیولوژی گرایش صنعتی |
| شناسه افزوده : | جلیلی ، مریم السادات، استاد راهنما آبکار ، مرتضی، استاد مشاور |
| توصیفگرها | باسیلوس کوآگولانس، کوآگولین، سابتیلوزین، پروتئین ضدمیکروبی، آنتی میکروبیال پپتید، مقاومت آنتی¬بیوتیکی، باکتریوسین Bacillus Coagulans, Antibiotic resistance, Antimicrobial Peptids, Bacteriosin, Coagulin, Subtilosin |
| چکیده : | در سال‌های اخیر افزایش روزافزون مقاومت‌های آنتی‌بیوتیکی میکروارگانیسم‌ها و نیز عوارض جانبی ناشی از تجویز و مصرف نابجا و بی‌رویه آنتی‌بیوتیک‌ها، پژوهشگران را به مطالعه و بررسی اثرات ضدمیکروبی پروبیوتیک¬ها راغب ساخته است. بیماری‌های عفونی همراه با مقاومت چند دارویی، مشکل اصلی بهداشت عمومی در کشورهای در حال توسعه با افزایش مرگ و میر و عوارض هستند. جدای از تهدید مقاومت به چند دارو، چندین مطالعه تایید کرده‌اند که استفاده مداوم از آنتی بیوتیک‌ها می تواند به میکروفلور مشترک انسان آسیب برساند. تمرکز تحقیقاتی برای یافتن جایگزین مؤثر برای مبارزه با این پاتوژن¬ها بدون تأثیر بر فلور طبیعی ضروری است. در این راستا استفاده از پروبیوتیک¬ها و ترکیبات متابولیکی طبیعی آن¬ها می‌تواند جایگزینی در صنایع مختلف غذایی و دارویی باشد. درمیان پروبیوتیک¬ها، باکتری باسیلوس کوآگولانس در تولید، ذخیره سازی، حمل و نقل و مدیریت بسیار پایدار است و آن را به کاندیدای مناسب¬تری برای فرمولاسیون های غذایی و دارویی تبدیل می¬کند. باسیلوس کواگولانس یکی از چندین گونه‌ای است که اندوسپور تولید می‌کند که با کمک آن محیط‌های با شرایط سخت را تحمل کند. پروتئین‌های ضد میکروبی کوآگولین و لاکتوسپورین توسط این باکتری تولید می-شود. پپتیدهای ضدمیکروبی به طور سنتی به عنوان نگهدارنده‌های زیستی برای افزایش ماندگاری محصولات غذایی بدون به خطر انداختن خواص تغذیه‌ای و ارگانولپتیک آن‌ها استفاده می‌شوند.
در این پژوهش سویه باسیلوس کوآگولانس ATCC 7050 تهیه گردید و بر روی محیط نوترینت آگار کشت داده¬شد. بعد از انجام رنگ¬آمیزی و تست و تایید سویه، سویه از لحاظ فیزیولوژیکی بررسی و منحنی رشد آن رسم شد. همچنین محیط کشت جدیدی طراحی و تولید شد و میزان تولید پپتید در سه محیط¬ (دست ساز، NB، و MRS) با بررسی میزان خاصیت ضد میکروبی سوپرناتانت حاوی ماده ضد میکروبی بر علیه باکتری گرم مثبت استافیلوکوکوس اورئوس با استفاده از روش چاهک آگار مورد ارزیابی قرار گرفت و مقایسه شد. ماده ضد میکروبی تولیدی توسط دستگاه فریزدرایر تغلیظ شده و پایداری نمونه ها در دماهای مختلف و زمان¬های نگهداری مختلف بر اساس میزان خاصیت ضد میکروبی آن‌ها مورد بررسی قرار گرفت. برای تعیین غلظت پروتئین نمونه‌ها تست برادفورد گذاشته شد. علاوه بر آن بهترین زمان و دمای انکوباسیون تولید ماده ضد میکروبی و اثر آن روی سایر باکتری¬های بیماری¬زا ازجمله اشرشیاکلی، لیستریا منوسیتوژنز، آسینتوباکتر بومانی و کلبسیلا پنومونیه مورد بررسی قرارگرفت. پروفایل آمینواسیدی آن نیز با HPLC و حضور ژن¬های پروتئین¬های ضد¬میکروبی کواگولین، سوبتیلین و سوبتیلوزین با انجام PCR و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی مورد بررسی قرار گرفتند.
نتایج نشان دادند که پست بیوتیک تولیدی توسط باسیلوس کوآگولانس روی باکتری¬های بیماری¬زای گرم مثبت بیشتر از باکتری‌های گرم منفی اثر ضدمیکروبی نشان داد. محیط دست¬ساز استفاده شده در این پژوهش با استفاده از 5 درصد عصاره استخوان، 1 درصد پودر مخمر و 2 درصد آگار برای کشت باکتری¬های استافیلوکوکوس اورئوس، اشرشیاکلی و باسیلوس کواگولانس طراحی شد. بهترین روش تغلیظ نمونه ها روش فریزدرایر بود و از میان سه محیط کشت مورد بررسی، بر اساس نتایج به‌دست آمده قطر هاله عدم رشد برای باکتری استافیلوکوکوس اورئوس در محیط دست¬ساز (14 میلی متر بعد از تغلیظ نمونه) بهترین نتیجه را در مقایسه با قطر هاله عدم رشد پپتید ضدمیکروبی تولیدی در محیط های NB (12 میلی متر) و MRS (11 میلی متر) داشت که با نتایج حاصل از اندازه‌گیری میزان پروتئین همخوانی داشت. این پروتئین با میزان دوبرابر (30 میکرولیتر) روی باکتری¬های بیماری¬زایی مثل اشرشیاکلی(قطر هاله عدم رشد 12 میلی متر)، لیستریامنوسیتوژنز (قطر هاله عدم رشد 15 میلی متر)، آسینتو باکتر (قطر هاله عدم رشد 7 میلی متر) و کلبسیلاپنومونیه (قطر هاله عدم رشد 6.5 میلی متر) اثر ضدمیکروبی نشان داد. نتایج بررسی پایداری نشان داد که بهترین شرایط نگهداری برای سوپرناتانت حاوی پپتید ضدمیکروبی در دمای 20- درجه سانتیگراد و به مدت 4 هفته بود و نیز تا دمای 50 درجه سانتیگراد برای مدت 30 دقیقه فعالیت ضد میکروبی را حفظ نموده و مقاومت دمایی دارد. تولید پپتید ضدمیکروبی در فاز سکون باکتری بود و بهترین شرایط برای تولید پپتید ضدمیکروبی و در محیط دست¬ساز در دمای 37 درجه سانتیگراد و بعد از 48 ساعت بدست آمد. طیق نتایج HPLC نیز بیشترین میزان آمینواسید نمونه مربوط به آمینواسید لیزین بود و نتایج PCR نیز حضور باند بین 3000 - 3500 جفت بازی که مربوط به کواگولین است و باند 250-300 جفت بازی که مربوط به سابتیلوزین است را در باسیلوس کوآگولانس ATCC7050 ثابت کرد. توالی باند سابتیلوزین به میزان 100 درصد با ژن سابتیلوزین در گونه Bacillus sp.MD-5 و Bacillus sp.JS مشابهت داشت.
در مجموع محیط دست ساز در این مطالعه با وجود قیمت پایین‌تر نسبت به دو محیط دیگر، دارای کارایی خوبی در تولید پپتید ضد میکروبی بود. خصوصیات ضد میکروبی با طیف وسیع برعلیه تعداد زیادی از باکتری‌های گرم مثبت و گرم منفی و نیز مقاومت بالای آن در برابر دما و قابلیت نگهداری طولانی پپتید تولید شده در باکتری باسیلوس کواگولانس ATCC 7050 ، آن را کاندید مناسبی برای استفاده در محصولات پروبیوتیک می‌نماید |
| لینک ثابت رکورد: | ../opac/index.php?lvl=record_display&id=14425 |
| زبان مدرک : | فارسی |
بررسی تولید پپتید های ضدباکتری از باسیلوس کوآگولانس (1402) / موسوی ، الهام سادات، نویسنده