| نوع مدرک: | متون چاپی |
| سرشناسه | محرابی ، ناهید، نویسنده |
| شماره بازیابی : | BIO microb I 28 1404 |
| عنوان : | جداسازی باسیلوس های تولید کننده باکتریوسین از خاک و بررسی ویژگی های فنوتیپی و فعالیت ضدباکتریایی آنها |
| عنوان موازی : | Isolation of bacteriocin-producing bacilli from soil and investigation of their phenotypic characteristics and antibacterial activity |
| ناشر: | دانشگاه شهید اشرفی اصفهانی: اصفهان |
| سال نشر : | 1404 |
| صفحه شمار: | 87ص |
| شابک/شاپا | 26114 |
| یادداشت | پایان نامه کارشناسی ارشد/ رشته میکروبیولوژی گرایش صنعتی |
| شناسه افزوده : | شاهرخ ، سمانه، استاد راهنما شهیدی ، معصومه سادات، استاد مشاور |
| توصیفگرها | باسیلوس خاکی، باکتریوسین، پپتیدهای ضدمیکروبی soil Bacillus, bacteriocin, antimicrobial peptides |
| چکیده : | مقدمه: میکروارگانیسمهای خاک بهعنوان منابع غنی ترکیبات زیستفعال شناخته میشوند که نقش مهمی در پزشکی، کشاورزی و صنعت دارند. در این میان، باکتریهای جنس Bacillus به دلیل توانایی تولید اسپور و متابولیتهای ثانویهای مانند باکتریوسینها، اهمیت ویژهای یافتهاند. با توجه به گسترش مقاومت باکتریایی نسبت به آنتیبیوتیکها، استفاده از این ترکیبات طبیعی میتواند جایگزینی پایدار و ایمن باشد.این پژوهش با هدف جداسازی و شناسایی ایزولههای Bacillus تولیدکننده باکتریوسین از نمونههای خاک استان اصفهان و بررسی فعالیت ضدباکتریایی، ضدبیوفیلم و تعیین MIC و MBC انجام شد.
روش کار: مواد و روشها تعداد 42 نمونه خاک از مناطق شهری و بیابانی استان اصفهان (شهرهای دلیجان، خمینیشهر، شاهینشهر، کاشان، نائین و نجفآباد) جمعآوری و بهصورت کامپوزیتهای دو یا سهتایی ترکیب شدند تا تنوع میکروبی افزایش یابد. نمونهها در محیطهای کشت عمومی کشت داده شدند و پس از خالصسازی، شناسایی ایزولهها با استفاده از آزمونهای فنوتیپی (مورفولوژی کلنی، رنگآمیزی گرم و بررسی اسپور) و بیوشیمیایی (کاتالاز، اکسیداز، همولیز و آزمونهای قند و نمک) انجام گرفت. عصارههای بدون سلول ایزوله ها به روش تک کشت و هم کشت تهیه و فعالیت ضدباکتریایی آن¬ها علیه استافیلوکوکوس اورئوس و اشرشیا کلی با روش انتشار در چاهک و در بازه زمانی 5 ماهه ارزیابی شد. استخراج ترکیبات موثر عصاره¬ها به روش تغلیظ با استون سرد انجام گردید.حداقل غلظت مهارکننده (MIC) و حداقل غلظت کشنده (MBC) عصاره بدون سلول بهترین ایزوله به روش میکروتیترپلیت تعیین گردید. همچنین، اثر ضدبیوفیلم آن علیه استافیلوکوکوس اورئوس و اشرشیا کلی با روش میکروتیترپلیت بررسی شد. در نهایت ، شناسایی مولکولی از طریق PCR ژن 16S rRNA با استفاده از پرایمرهای یونیورسال F27 و R1492 و تحلیل توالیها بهوسیله BLAST انجام گرفت. در نهایت، درخت فیلوژنتیک با بهرهگیری از نرمافزار MEGA X10 و توالیهای ژن 16S rRNA ترسیم شد.
نتایج: از 42 نمونه خاک، 22 ایزوله گرممثبت اسپورزا جداسازی شد. آزمونهای فنوتیپی و بیوشیمیایی ویژگیهای استاندارد باسیلوس (کلنی سفید خشک، کاتالاز مثبت، اکسیداز منفی، همولیز بتا در برخی) را تأیید کرد. در آزمون کشت متقاطع، 3 ایزوله علیه استافیلوکوکوس اورئوس ، 3 ایزوله علیه اشرشیا کلی و 2 ایزوله علیه هر دو فعالیت داشتند. اگرچه عصاره خام به دست آمده از تمامی ایزوله ها در روش تک کشت فاقد اثر ضدباکتریایی بود، ایزوله B4 در روش هم کشت، هاله مهاری 20 میلیمتری علیه استافیلوکوکوس اورئوس ایجاد کرد که این اثر ضدباکتریایی آن تا پنج ماه نسبتاً پایدار بود. حداقل غلظت مهارکننده (MIC) پودر عصاره بدون سلول ایزوله B4 علیه هر دو باکتری اشرشیاکلی و استافیلوکوکوس اورئوس برابر mg/ml 5/22 بود و حداقل غلظت کشنده (MBC) علیه اشرشیاکلی و استافیلوکوکوس اورئوس به ترتیب mg/ml 5/22 و mg/ml 90 یود. اگرچه این عصاره در غلظت mg/ml 90 علیه هر دو باکتری اثر ضد بیوفیلم 100% نشان داد، در غلظتهای پایین¬تر اثر ضدبیوفیلم علیه استافیلوکوس اورئوس کاهش بسیار محسوسی داشت.
نتایج شناسایی مولکولی ایزوله B4 به روش PCR، همسانی 100 درصد این ایزوله را Bacillus subtilis subsp. inaquosorum (100% همسانی) نشان داد و روابط تکاملی با ترسیم درخت فیلوژنیک و بوتاسترپ 100% تأیید شد.
نتیجهگیری: یافتهها بیانگر پتانسیل بالای باسیلوسهای خاکی در تولید ترکیبات ضدمیکروبی و ضدبیوفیلم هستند. این نتایج میتواند در توسعه عوامل زیستی جایگزین آنتیبیوتیکها و کاربردهای دارویی و کشاورزی مورد استفاده قرار گیرد |
| لینک ثابت رکورد: | ../opac/index.php?lvl=record_display&id=14950 |
| زبان مدرک : | فارسی |
جداسازی باسیلوس های تولید کننده باکتریوسین از خاک و بررسی ویژگی های فنوتیپی و فعالیت ضدباکتریایی آنها (1404) / محرابی ، ناهید، نویسنده